α-葡萄糖苷酶活性抑制檢測試劑盒食品分析用（297-786010）

來源：作者：人氣：-發表時間：2020-06-19 13:28:00【大中小】

Wako開發了含有α-葡萄糖苷酶可保證酶活性的"α-葡萄糖苷酶活性抑制檢測試劑盒"（以下均稱為"試劑盒"）。與"LabAssay™葡萄糖檢測試劑盒"配套使用（需單獨購買），可用于檢測食品對α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用。試劑盒中的α-葡萄糖苷酶以二糖（蔗糖和麥芽糖）作為反應底物，可保證酶的降解活性，因此被認為可用于測定α-葡糖苷酶活性（IC50）的抑制劑作用。試劑盒的研發及特點說明如下。西寶生物作為WAKO授權的一級代理，品質保證，貨期穩定，詳情致電400-021-8158

研發背景

近年來，日漸豐富的膳食致使肉食品攝入量增加、膳食不均衡和營養過剩，導致了糖尿病、肥胖和血脂異常等生活方式病。此外代謝綜合征的發展也日益嚴峻。

糖尿病患者數量呈上升趨勢尤為明顯。根據日本2012年的國家健康和營養調查推算，約有950萬人嚴重懷疑患有糖尿病，大約1,100萬人有患糖尿病可能性（糖尿病潛在人群）。

治療糖尿病臨床使用的藥物之一就是α-葡糖苷酶抑制劑。淀粉被淀粉酶分解生成麥芽糖等二糖，α-葡萄糖苷酶可分解這些二糖生成葡萄糖，從而升高血液的血糖值。因此，通過抑制α-葡萄糖苷酶可減少葡萄糖生成量，從而抑制血糖升高。目前，研究者們正致力于從各種各樣的植物中提取α-葡萄糖苷酶抑制物質，并將其應用于抑制血糖值上升的食品中。

目前為止，有若干關于計算α-葡糖苷酶抑制劑的IC50值步驟的報告，但是卻沒有檢測試劑盒類商品市售。此外，檢測哺乳動物小腸來源的α-葡糖苷酶產品很少，其中一部分產品甚至無法保證酶活性。

因此，定量檢測α-葡萄苷酶活性的抑制作用，且具有良好重復性，是有一定難度的。隨著研究人員對用于定量檢測α-葡萄糖苷酶活性抑制作用試劑需求的增加，在此背景下，Wako開發了本試劑盒。

研發過程

在介紹"試劑盒"的開發過程之前，先說明一下"LabAssay™ 葡萄糖檢測試劑盒"的IC50值檢測和計算原理（圖1）。

LabAssay™ 葡萄糖檢測試劑盒的檢測原理：當顯色溶液作用于樣本時，樣本中的葡萄糖會因顯色劑中變旋酶的作用，迅速從α型轉換為β型。β-D-葡萄糖在葡萄糖氧化酶（GOD）的作用下被氧化，同時產生過氧化氫。產生的過氧化氫在共存的過氧化物酶（POD）作用下，與顯色試劑中的苯酚和4-氨基安替吡啉發生定量氧化縮合，產生紅色色素。通過檢測紅色色素的吸光度，可定量檢測樣本中的葡萄糖濃度。

圖1．LabAssay™ 葡萄糖檢測試劑盒的檢測原理

基質濃度的研討

本來GOD僅與β-D-葡萄糖反應，但由于其對麥芽糖也具有弱特異性，因此即使背景上升，也可能無法準確的評價抑制作用。因此，要在檢測IC50值的基礎上探討最佳的麥芽糖濃度。麥芽糖和顯色試劑反應30分鐘后，在濃度為18.5mmol/L以下時，空白吸光度變為0.1以下，因此采用濃度18.5mmol/L以下作為候選濃度（表1）（制備方法參照圖3）。

表1．麥芽糖濃度的研討

麥芽糖濃糖（mmol/L）	0	7.4	18.5	37	74
吸光度（A₅₀₅）	0.036	0.057	0.099	0.183	0.337

接下來，研究濃度為18.5mmol/L以下的麥芽糖中酶活性的結果，維持酶活性2小時以上的基質濃度為18.5mmol/L，因此麥芽糖的最終濃度定為18.5mmol/L。（圖2）

圖2．酶反應曲線

試劑盒中含有的酶試劑是從大鼠小腸來源的刷狀緣膜中提取后，通過離心處理得到的最適成分的懸濁液。若粒子粒徑大，會迅速沉淀，在收集時會導致測量值產生波動。因此，為了防止試劑盒中酶試劑的迅速沉淀，采用減小粒子粒徑的制造方法，使測量值不會產生波動。表2顯示了使用阿卡波糖作為抑制劑的三次實驗結果（制備方法參照圖3）。

表2．阿卡波糖的IC₅₀值

基質	IC₅₀值（μg/mL）	CV值（%）
麥芽糖	0.10	1.8
蔗糖	1.28	0.9

試劑盒操作步驟

圖3．試劑盒操作步驟
基質液和酶稀釋劑等的詳細制備方法請參考產品附帶的使用說明書。

在"試劑盒"的基質（麥芽糖，蔗糖）溶液中，加入連續稀釋后的檢測樣本（α-葡糖苷酶抑制劑）溶液以及 "試劑盒"中的α-葡萄糖苷酶懸濁液。在37℃下反應后，在沸水浴中加熱使反應終止，用"LabAssay™ 葡萄糖檢測試劑盒"定量檢測游離的葡萄糖，并計算出樣本的IC50值（圖3）。

結語

本試劑盒的開發使α-葡萄糖苷酶抑制劑的IC50值的測定成為可能。期待該試劑盒在今后的各種功能性食品的開發和探索中給與一臂之力。

α-葡萄糖苷酶活性抑制檢測試劑盒

產品編號	產品名稱	規格	包裝
297-78601	α-Glucosidase Inhibitory Activity Assay Kit α-葡萄糖苷酶活性抑制檢測試劑盒	食品分析用	96次

α-葡萄糖苷酶活性抑制檢測試劑盒能測定對α-葡萄糖苷酶的抑制作用。與LabAssay™ 葡萄糖（血糖）檢測試劑盒配套使用，可用于檢測食品等成分中對α-葡萄糖苷酶活性抑制作用。

酶試劑	1mL	2	α-葡萄糖苷酶
緩沖劑	50mL用	2	馬來酸/順丁烯二酸二鈉
基質液1	20mL用	2	D-(+)-麥芽糖
基質液2	20mL用	2	蔗糖
陽性對照	100mg	1	阿卡波糖

*阿卡波糖是一種新型口服降糖藥。在腸道內競爭性抑制葡萄糖苷水解酶。降低多糖及蔗糖分解成葡萄糖，使糖的吸收相應減緩，因此可具有使飯后血糖降低的作用。

<試劑盒以外所需的器具器材>
●　LabAssay™葡萄糖檢測試劑盒.［產品編號. 298-65701］
●　96孔透明微孔板
●　酶標儀（505nm吸光Filter）
●　微量移液器
●　恒溫槽（37℃）

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